焦虑症是一种常见精神疾病，以急性焦虑反复发作为特征，主要表现为发作性或持续性的恐惧、担心和焦虑、紧张等情绪反应，并伴有自主神经功能失调、肌肉紧张与运动不安等症状。临床上焦虑症主要分为广泛性焦虑障碍、惊恐障碍、社交焦虑障碍、强迫障碍、特异性恐惧症等类型。在精神障碍中，焦虑症的终身患病率最高，影响到30%的人口的寿命，严重影响人们的生活质量和水平。 常用的大小鼠焦虑行为实验方法可以分为两大类，非条件反射和

小伙伴们早上好，今天聊下玄学实验-Western blot，如果在实验中没有观察到阳性条带或者条带较弱，可能有多种原因导致这种情况。以下是一些可能的原因及其解决方法： 1 蛋白质表达量低：目标蛋白在样本中的表达量可能低于检测限，导致条带弱或不可见。 解决方法：使用更多的细胞或组织样本，或者增加蛋白的加载量。 2 不适当的抗体：使用的一抗或二抗可能特异性不强，或者稀释比例不当。 解决方法：验证抗体的特异性，优化抗体稀释比例。 3

如果在实验中没有观察到阳性条带或者条带较弱，可能有多种原因导致这种情况。以下是一些可能的原因及其解决方法： 1 蛋白质表达量低：目标蛋白在样本中的表达量可能低于检测限，导致条带弱或不可见。 解决方法：使用更多的细胞或组织样本，或者增加蛋白的加载量。 2 不适当的抗体：使用的一抗或二抗可能特异性不强，或者稀释比例不当。 解决方法：验证抗体的特异性，优化抗体稀释比例。 3 样本处理不当：样本在裂解、煮沸或电泳过程中

一、PCR反应组分 1.模板DNA： 来源比较广，用于复制的PCR模板可以是任何DNA来源，如基因组DNA（gDNA）、互补DNA（cDNA）和质粒DNA。不过，DNA的组成或复杂度会影响PCR扩增的最佳起始量。例如，在起始量为50 µL 的PCR中，只需0.1–1 ng质粒DNA，而gDNA则需要5–50 ng。最佳模板起始量还取决于所使用的 DNA 聚合酶类型；经过改造 的DNA聚合酶对模板的亲和力更强，灵敏度更高，所需的DNA起始量更少。对DNA起始量的优化很重要，因为起始量过高会增加发生非特异性扩

　　近期是过敏性鼻炎的多发期，本人于2017年8月7日上午挂内蒙古医科大学附属医院耳鼻喉科门诊专家陶

内参，顾名思义，就是内部参照。它在 Western Blot 实验中起到了重要的作用，用于校正蛋白质样本的加载量差异和检测系统的误差。就像是一把尺子，可以让我们在比较不同样本之间的蛋白质表达时有一个基准。 那么，如何选择内参呢？一般来说，我们需要考虑以下几个因素： 1、蛋白表达丰度：内参应该在样本中稳定表达，且表达量相对较高，这样才能有效地检测到内参信号。 2、分子量：内参的分子量应该与目标蛋白的分子量有明显差异，以便在

一、大、小鼠割（剪）尾采血 当取血量较少时采用本法。采血前将鼠尾部浸在50℃左右温水中数分钟或用大功率灯泡照射数分钟，麻醉动物，使尾部血管充盈。用75%酒精擦拭鼠尾，用锋利的刀片在尾部作一横切口，割破尾静脉或动脉，让血液自由滴入盛器或用毛细吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。若多次取血，最好从鼠尾末端开始。小鼠每次可取血0.1ml左右，大鼠每次可取血0.3～0.5ml。若只需要几微升血量，可用锐器（刀或剪刀）垂直割去

PCR反应中的主要由引物、 4种三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)、Mg2+、模板和Taq DNA聚合酶五个成份组成。各个组份都能影响 PCR 结果的好坏。 1引物 PCR反应产物的特异性由一对上下游引物所决定。引物的好坏往往是PCR成败的关键。引物设计和选择目的DNA序列区域时可遵循下列原则： （1） 引物长度约为16-30 bp， 太短会降低退火温度影响引物与模板配对，从而使非特异性增高。太长则比较浪费，且难以合成。 （2）引物中G+C含量通常为40%-60%，可按下式粗略估计引物

分子克隆实验——无缝克隆 今天和大家讲讲无缝克隆常见的问题以及解决方法。 1.平板上很少或者没有克隆菌落 建议使用试剂盒附带的阳性对照，可排除试剂盒本身的影响。进一步判定，主要有以下可能的情况和建议： 01载体制备 线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。 02插入片段制备 1、引物设计不正确：同源臂15~25nt（不计算酶切位点）,CG含量40~60%。 2、线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。若线性化载体与插入片段已经过纯化，

液氮罐的定义 采用真空绝热保温技术制作的容器，放液氮于其中，利用液氮常压下沸点-196℃的原理，实现生物样本长时间低温保存的设备。 液氮罐的分类 根据液氮罐的不同指标，液氮罐有不同的分类。 按用途分 按用途分，可以分为液氮存储罐和液氮运输罐两种。其中液氮存储罐适合于不同容量长时间的稳定存储，罐体不能用来运输，运输存在安全隐患。液氮运输罐具有体积小和减震结构设计，适用于少量样本的转移存储和短距离运输使用。 按液

脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞，至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来，而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用，也可以冷冻保存，并在以后批量使用。 下面是编译自https://www.mabtech.com/knowledge-hub/isolation-freezing-and-tha的关于如何最好地（i）分离、（ii）冻存和（iii）复苏脾细胞的详细指南。 脾细胞的分离 材料 细胞过滤器，70µm尼龙，无菌 无菌剪刀和镊子或镊子 无菌培养皿 巴氏移液管，无

菌种活化就是将保藏状态的菌种 放入适宜的培养基中培养 逐级扩大培养得到纯而壮的培养物 即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物 菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。 01、一般菌种临时存放及活化 1.低温保存管应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2.准备 37℃之 70﹪酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代

16年科研经验，大兴机场附近的MDL实验中心，是个不错的机构，可以承接动物实验 细胞实验 病理实验 蛋白免疫实验 分子实验，基因检测 生物信息服务等，参与实验还可以提供住宿

本期小助手帮大家详解一个细胞实验，从鼠的脂肪细胞中分离巨噬细胞的实验，步骤多、操作繁琐，但别急，跟着小助手一步一步来做，话不多说，上干货。 实验步骤 01 分离•用PBS清洗脂肪组织，并将组织放在冰上的培养皿中，用剪刀将组织切成小块（约3-5mm）。•将切碎的组织转移到含有7ml冰冷消化缓冲液的10ml圆底管中，此操作需一直保持在冰上。对于>1g的脂肪，将组织切碎并转移到含有10ml冰冷消化缓冲液的50ml锥形管中。•加入1ml（如脂肪组

公司在北京运行近十年，实验室位于北京大兴，可来实验室参观，病理实验，细胞分子实验，动物实验等常规实验及检测都可接；课题设计及整体实验也有较多成功案例，欢迎各位老师来询，问问不亏#实验# 。

一、原理： Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂含有WST-8，它在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 CCK-8法因其高灵敏度，无放射性的比色检测法的优点，可替代传统的MTT法。 二、检测步骤： 向96孔的各孔中加入100μl细胞悬液。 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。 在37

免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术 (immunocytochemistry) 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体 (或抗原) 对组织内抗原 (或抗体) 的分布进行组织和细胞原位检测技术。 一、免疫组化技术的基本原理 应用免疫学及组织

活性氧（ROS）的流式检测通常是通过使用荧光探针如DCFH-DA来监测细胞内活性氧水平的变化。以下是该检测方法的一些关键步骤和原理： 01选择荧光探针常用的荧光染料是DCFH-DA，它能够进入细胞并在细胞内被酯酶水解成DCFH。DCFH随后可以被细胞内的活性氧氧化，生成发荧光的DCF。 02DCFH-DA是一种用于检测活性氧ROS的荧光探针，全称为2,7-二氯荧光素二乙酸酯。其工作原理为：DCFH-DA本身没有荧光，但可以自由穿过细胞膜，一旦进入细胞，它会被细胞内的酯

无条带 1.蛋白表达量低：充分了解研究的蛋白，表达量低适当增加上样量，20-50μg。 2.本底表达还是诱导表达，非特异性条带。 3.样本提取蛋白使用蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，并设置对照，避免蛋白降解。 4.检查一抗特异性是否适合目的蛋白的种属，看说明书，一抗二抗最好买经过验证的。 5.蛋白转膜效率低：可以丽春红染色检查转膜效率,分子量小的蛋白，注意用小孔茎的膜。 6.适当调整优化转膜的时间和电流。 7.分子量表达低的选择超敏的发光

研究生培养是高等教育的一项重要任务。研究生导师责任重大。导师不只是要向学生传授知识和方法，还负有传承精神、文化的重任。所谓带学生，就是和学生一起探求、开发，不是说有学问、学术地位高就能带好学生。导师要时刻牢记重任在肩，如何当好导师是大学教师的一个重要话题。今天我主要谈谈作为导师所不应做或不能做的十件事，可称之为“十戒”，作为导师应遵守的要则。 01 光当老板 上个世纪七十年代末八十年代初我读研究生的时候

在学习过程中，我们经常会遇到各种PCR字眼，什么qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR，你了解PCR这个大家族吗？还在傻傻分不清吗？ 一、什么是PCR？ PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是一种体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术。PCR技术自问世以来，在生物科学领域、分子诊断领域、亲子鉴定、法医鉴定以及犯罪调查等方面发挥了巨大作用，是迄今为止最为重要的技术之一。经过演化和革新，PCR技术已经发展了三代：普通PCR技术、实时

外泌体是一种细胞分泌的微小膜泡，大小为30~150nm的磷脂双分子结构，可在细胞间传递物质和信号。它在机体内广泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、脑脊液等各种体液中。 外泌体携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。 但外泌体所存在的体液环境复杂，在尺寸、形态和生化特性等方面又存在着较大的差异，因此如何能有效地分离出外泌体以供

实验小鼠注射给药包括腹腔注射、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射等多种方式。注射位置不同，其给药的最大剂量以及使用的针头大小均有区别。 小鼠不同注射位置的最大注射剂量

提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞系。细胞复苏是细胞培养的重要环节，下面小编具体给大家介绍下细胞复苏的protocal和注意事项！ 01、细胞复苏的原理 细胞复苏是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。当恢复到常温状态时，细胞的形态结构保持正常，生化反即刻恢复。细胞复苏

淋巴细胞和NK细胞的生成 Lymphocyte and NK Cell Production CLP被认为能产生B淋巴细胞、T淋巴细胞和NK细胞。骨髓中B淋巴细胞和T淋巴细胞祖细胞的发育与抗原无关。SCF和Flt3L似乎都参与了小鼠早期淋巴系祖细胞的生成。 The CLP is believed to give rise to B lymphocytes, T lymphocytes, and NK cells.16 The development of B lymphocyte and T lymphocyte progenitors in bone marrow is antigenindependent. Both SCF and Flt3L appear to be involved in the production of early lymphoid progenitor cells in mice. B淋巴细胞祖细胞在大多数哺

目的和原理 尽管胃不是药物的主要吸收场所，还是有某些由胃粘膜吸收的报道，用大鼠胃瘘技术直接测定胃的药物吸收。 操作步骤 雄性 wistar大鼠，体重220~300g，50mg/kg戊巴比妥i.p.麻醉，颈静脉插管，用以给予肝素化盐水(3000IU/kg)和实验过程中替换全血。实验前立即从肝素化供血大鼠采集替换血。在颈动脉作另一插管，用以收集循环血液样品。上腹部正中切口，注意结扎止血，用丝线结扎右侧胃网膜动静脉分支，然后用丝线结扎胃和左肝小叶后韧带，

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢？ 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或

分子克隆（基因克隆/DNA重组/载体构建）技术是一种在分子水平上操作的技术，用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来，然后通过体外重组、转化和转导等方法，将其插入到适合的克隆载体中，并将重组克隆载体引入到合适的寄主体内进行复制与扩增。可以应用于蛋白表达、病毒包装、基因治疗、细胞治疗、mRNA疫苗、RNA干扰、细胞功能等研究。 具体操作流程：一、聚合酶链式反应（PCR）DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，

免疫组织化学技术：检测组织原位表达的肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等抗原性物质。 免疫 immuno- 抗原抗体的免疫反应 组织 histo- 检测组织中表达的抗原性分子 化学 chemistry 酶促/荧光可见反应 （一）组织和细胞标本的准备 1.组织标本的取材 —— 取材新鲜，固定及时，形态完好。 2. 细胞标本的准备 （1）活体细胞标本： 印片法、穿刺吸取法、沉淀法 （2）培养细胞标本： ① 细胞涂片: 将细胞制成悬液（10^6）涂在 涂有切片粘合