昨天老板把冰箱里那批老tumor样本全打包装箱寄出去了。 这下我是彻底闲下来了。 下午坐在工位上，把代做那边发来的第一批数据整理了一下。本来以为自己还要拿ImageJ重新调调对比度，结果人家给的压缩包里直接带了现成的多色拆解图。 顺手把那些算好的细胞距离散点图和热图往PPT里一拖，排好版，整个过程没超过一小时。 想想以前为了攒几张能看的前期数据图，在暗室里一蹲就是一整天。拍回来的图背景还脏得要命，调参数调到眼睛发酸。 现

昨天组会上老板拿代做的那张图拉踩完我之后，今天态度直接转弯了。 上午溜达到我工位，让我把-80度冰箱里那批放了快半年的human tumor老标本全翻出来。 说既然现在外面做这种十几标的技术这么成熟，与其留着在冰箱里占地方，不如全打包寄出去，一块把数据出了。 我听完都愣了。以前这老板买个两千块的基础单抗都要让我比价三天，现在花起马内来眼睛都不眨一下。 不过我也乐得清闲。立刻戴上手套去翻冰箱，生怕他下一秒反悔让我自己手染。

很多同学费劲染完了十几标的human tumor切片，跑出数据一看，到处都是双阳性甚至三阳性的细胞。结果拿着图去投文章，直接被审稿人一句“怎么证明这不是串色导致的假阳性”给问懵了。 如果没法证明共定位的真实性，整个微环境机制的故事就全毁了。今天结合实操经验，盘点一下mIF里出现假阳性共定位的3个重灾区： 1. 光谱溢漏没扣干净 很多时候不是细胞真表达了两个抗原，而是你把两个波长太近的荧光素分给了相邻的靶点。如果前期建单染光谱

师弟上周找老板哭惨，把那些human tumor切片寄出去之后，今天那边把初步的预实验图发过来了。 他拿着平板跑我工位上来回晃。 我扫了一眼，十几个通道拆分得清清楚楚，背景干干净净。跟他上周自己在微波炉里煮烂的那几张废片比，确实是两个世界的东西。 这小子现在尾巴快翘天上去了。跟几个同门在那吹，说这图放进文章里绝对拉高档次，好像这图是他自己染出来的一样。 其实也能理解。以前在暗室里洗切片洗到手发白，最后出一堆破烂数据，

很多同学做human tumor切片的十几标mIF，满怀期待去上机，结果发现一整块组织边缘部分亮得刺眼，甚至全串色了，但核心区域却是暗的，什么信号都没有。这种典型的“边缘效应”直接毁了整张切片。 今天继续《解惑》系列，总结几个实操里导致边缘效应的致命细节。 第一，组化笔画得太贴近组织。大家为了省点抗体，喜欢把疏水圈画得紧贴着标本。结果边缘的组织沾到了组化笔里的有机溶剂，疏水性改变，抗体和荧光素在那一圈疯狂沉积洗不掉。

很多同学私信说，做human tumor切片的十几标mIF，最大的问题不是染不出信号，而是染出来满屏都在亮。连没有细胞的间质区甚至玻片空白处都有一层光晕。 今天这期《解惑》就聊聊，这种严重影响后期圈选细胞的脏背景，到底是哪里出了问题。 第一个是抗体和荧光素浓度过载。大家做普通荧光习惯了，以为越亮越好。但TSA系统是级联放大，如果一抗按常规浓度加，二抗带来的酶会疯狂催化荧光素沉积。最后不仅靶点亮，周围一圈也跟着亮。一定要把

昨天看师弟把那批切片煮成一锅粥，顺手把我之前找外包的联系方式推给他了。 本以为他还要头铁自己做，没想到今天一早他直接端着那几张报废的human tumor玻片去找老板了。 估计是彻底破防了。进去主打一个卖惨，说自己手艺太差控制不好火候，样本用一片少一片，再瞎摸索十几标的条件，这批珍贵的队列全得报废。 顺便还拿手机给老板看了看那种带单细胞坐标和散点图的完整报告。 本来以为老板要发火，结果老板盯着报废的切片看了几眼，居然

周三下午，路过师弟工位，发现他居然捧着杯奶茶在看文献。 放上周这个时候，他估计还在暗室里对着一堆洗不干净的片子掉头发。昨天把那些human tumor的样本打包寄出去之后，这小子精神状态肉眼可见地变好了。 他拉着我看了眼代做那边刚发来的前期质控报告。人家把这十几个指标的单染光谱库全建好了，还专门拉了个曲线，把切片的自发荧光单独扣了出来。 我盯着那些密密麻麻的波峰曲线看了会，头都晕了。 跟师弟调侃说，其实就算你上周末没

昨天看师弟把那批切片煮成一锅粥，顺手把之前代做的联系方式推给他了[43]。 本以为他还要头铁几天，没想到这小子今天上午直接端着那几张报废的human tumor玻片去找老板了。 估计是彻底破防了，进去主打一个卖惨。说自己手艺太差控制不好火候，样本用一片少一片，再这么自己瞎摸索十几标的条件，这批珍贵的队列全得报废。 说完还顺滑地掏出手机，给老板看了看人家代做发来的那种带单细胞坐标和空间散点图的完整报告。 我本来以为老板会骂

周一刚到实验室，就听到暗室里传来师弟的一声叹息。 过去一看，他上周切的那批human tumor珍贵样本，彻底报废了。 为了给老板省点马内，他非要自己手动挑战十几标。周末在微波炉前面煮了两天，估计是火力没控制好，切片上的组织全掉光了。剩下侥幸没掉的几张，扫出来也是一片黑，啥信号都没有。 回想前几个月，我也是这么过来的。天天为个破荧光背景或者不发光的抗体愁得睡不着觉，洗切片洗到手抖。 幸好我后来顿悟了。现在手里攥着代做

昨天半夜那篇tumor微环境的文章一审意见回来了。 早上老板叫我去办公室，说审稿人有点难缠。有个意见是觉得我们光看免疫细胞总量不行，非要补充它们和成纤维细胞的空间距离，还得看不同区域的分布差异。 老板大手一挥让我周末加班，把数据重新用软件框出来算一遍。 听完我直接无语了。那可是十几标的全景图，几十万个细胞让我手动去框，别说周末了，下个月都弄不完。 回工位我赶紧点开之前代做的售后对话框，问能不能拿原来的原始数据

下午老板突然在群里发了个截图，是篇刚发的文章。 说人家里面有个空间距离分析的散点图特别好，能看出来免疫细胞是怎么被挡在外面的，让我把手里那批数据也画一个一样的。 我盯着那个复杂的坐标轴和热图看了半天，这玩意我哪会画。 去问了下生信平台的人，人家说这得用R语言跑专门的包，还得有每个单细胞的XY坐标文件。 我差点以为下半个月得去啃代码了。 抱着死马当活马医的心态，去翻上个月代做发回来的那个几十个G的压缩包。 结果

接着昨天老板写本子的事。 上午正摸鱼呢，老板突然发消息。说本子里的前期数据部分，让我把那张15标图的实验方法补一下。 要求详细到每个抗体的克隆号、稀释比例、微波热了几分钟。 看到消息心梗了一下。这要是自己一个月前手染的，现在绝对抓瞎。冰箱里那些分装管上的字估计早糊了，鬼记得当时用的哪个克隆号。 幸好当时是连着标本打包出去做的。赶紧去翻之前那边发来的交付文件夹。 里面有个实验报告的PDF，点开一看，表格列得整整

欢迎来到耳鼻喉接待室 [德] 克里斯蒂娜·罗伯、汉娜·格拉比 / 刘佳芮 / 贵州人民出版社 / 2022-12 链接：pan.baidu.com/s/13h3mcWUnjluFViVDkhhlSg?pwd=rgj3 提取码: rgj3 耳鼻喉医生的碎碎念科普，有趣知识大放送+内心OS叨不停，为这些常被忽视的神奇器官鸣不平！ 照顾好耳鼻喉，大脑更清爽，心情更顺畅，病毒炎症疲劳压力都退退退！ ◎ 编辑推荐 武汉大学中南医院耳鼻喉科医师专业审校，特邀生物医学可视化团队设计封面形象 📞 您好，这里是耳鼻喉接待室，请

熬到周五下午，组里人都快跑光了。 去倒水路过暗室，师弟还在里面捣鼓他那个洗不干净背景的切片。听他说周末打算住实验室，死磕那几个波长一直撞车的抗体。 有点心疼，但不多。 回工位把文章的最后两张核心图排完了。之前送出去做的那批human tumor切片，直接拿人家给的各通道拆解图一拼，加上配套生成的单细胞散点图，版面看着就很唬人。 根本不用自己再去费劲调什么对比度和阈值，现成的数据直接用就是爽。 有时候真觉得在实验室硬卷

生命八卦 袁越 / 生活·读书·新知三联书店 / 2010-1 链接：pan.baidu.com/s/1CKV3GBUkgPIR2vXa62cj0w?pwd=xfv5 提取码: xfv5 从美国归来的袁越接受过系统的生命科学训练，他的经典口头禅：有什么科学根据？《生命八卦》的科学根据来自哪里呢？自然是世界权威科学杂志发布的信息，以及主流综合性媒体的科学板块。袁越从中寻找与生命科学有关的最新报道，一旦发现感兴趣的话题，便动用一切可靠的搜索引擎，寻找一切有价值的素材，调动自己的知识储备，把科学

伤精与养精康复之道 彭鑫 / 科学技术文献出版社 / 2014-5-1 链接：pan.baidu.com/s/16A7v_ucQ66s-raR7O5sv8w?pwd=2gyj 提取码: 2gyj 戒除邪淫 肾精充足 孝养父母 阳气复元 积德行善 百脉通畅 一本现代人必看的书 一本青少年不可不知的书 一本写给青少年父母的书

今天下午本来想早点溜。 结果师弟又来了，拿着他刚整理好的超多标结果问我，这些图是不是可以直接放文章里。 我看了一眼，合成图确实挺好看。黑底，多色，细胞也清楚。 但再点开单通道，问题就来了。有个Marker明明应该在膜上，结果胞浆也亮一片。还有一个低表达指标，被他拉亮度拉得背景都起来了。 我跟他说，老板可能会先夸图好看，但审稿人不一定吃这套。 现在这种human tumor的超多标，不是截几张漂亮图就完事。单通道、阴性对照、区

昨天刚帮师弟看完那个12标panel，今天他又抱着电脑来了。 他说老板看完文献以后，不满足于“细胞多不多”了，非要看CD8离某些细胞到底有多近，还要算什么空间互作。 我听完沉默了一会儿。 以前我做IF，最多就是拍几张图，数一下阳性细胞。现在倒好，不仅要染十几个颜色，还要知道每个细胞的坐标，谁挨着谁，中间隔了多少微米。 师弟问我能不能用ImageJ手动量。 我说你要是不想毕业，可以试试。 这种human tumor切片，一张图里细胞密密麻麻。真

昨天刚帮老板排完学术海报，以为今天能安静写会儿文章。 结果师弟抱着电脑来找我，说他也想做一套human tumor微环境的超多标。 我本来还挺欣慰，觉得新人终于开始上道了。结果打开他的表格一看，12个指标，9个兔源，2个鼠源，还有一个抗体只写了品牌，克隆号空着。 我问他这个抗体在FFPE上验证过没。 他说说明书上写了IF。 我又问，是细胞爬片IF，还是切片IHC-P。 他沉默了。 说真的，我现在看到这种panel，第一反应已经不是看指标酷不酷了。先

上午帮老板排版个周末开会要用的学术海报。 要把tumor微环境里的那套复杂机制讲清楚，以前得切好几张连续切片。一排一排地贴上去对位置，排版能排到眼晕，还会被挑刺说切片位置对不上。 这次省事了。直接把之前拿回来的那张15标全景图往海报正中间一放。 十几种颜色叠在一起，背景纯黑。血管和免疫细胞怎么分布的一目了然。看着特有科技感，这颜值对那种传统的三色图完全是降维打击[3]。 老板过来瞅了一眼也觉得挺满意，说这种高级图印

今天周一，刚到实验室就看见新来的师弟在暗室门口发呆。过去瞅了一眼，他周末熬夜染的几个human切片全糊了。红绿通道串得没法看，分不清是真表达还是背景杂音。问他做没做单染对照和阴性质控，他一脸懵，说以为按着试剂盒说明书直接加抗体就行。简直看到上个月的自己。当初也是为了给组里省点马内，拿珍贵的tumor标本天天去试错。连最基础的抗体验证都没搞明白就想上多标，纯属浪费时间。现在我是彻底摆烂了。端着咖啡回工位，打开代

医学基础知识 2009-7 链接：pan.baidu.com/s/1k8ZExzG5_NurHZYhSXAuBQ?pwd=44rc 提取码: 44rc 《医学基础知识:医药卫生基础知识》讲述了：为加快医疗卫生事业改革与发展，优化医疗卫生机构专业技术人员队伍，提高医务人员整体素质，根据人事部《事业单位公开招聘人员暂行规定》，医疗卫生事业单位新进人员必须经过公开，招聘考试通过后方可录用。医疗卫生系统的招聘工作人员考试须遵循“公开、平等、竞争、择优、任人唯贤、德才兼备”的原则，采取考试与

巴尔扎克的柳叶刀 : 被医学塑造的19世纪小说 [美] 劳伦斯·罗斯菲尔德 / 汪浩 / 科学普及出版社 / 2023-6-1 链接：pan.baidu.com/s/1J918bbJMPwXrkgDaTrI52g?pwd=f7wa 提取码: f7wa 拿破仑未完成的事业，巴尔扎克用“柳叶刀”来完成。 文学中的摹仿理论，如何翻译现实中的医学成就，现实主义与医学进展，如何塑造了 19 世纪欧洲小说的面貌 ?医学与文学交相辉映，碰撞出精彩的理论火花。 _________________ 一部关于叙事医学与 19 世纪文学研究的经典著作，是对小说中存在

内科学（第9版） 葛均波，徐永健，王辰 著 / 人民卫生出版社 / 2018-7-1 链接：pan.baidu.com/s/1BURb77ehhY6kJfk_utbaeQ?pwd=5i55 提取码: 5i55 其修订和编写特点如下： 1．教材编写修订工作是在国家卫生健康委员会、教育部的领导和支持下，由全国高等医药教材建设研究学组规划，临床医学专业教材评审委员会审定，院士专家把关，全国各医学院校知名专家教授编写，人民卫生出版社高质量出版。　 2．教材编写修订工作是根据教育部培养目标、国家卫生健康委员会

关灯就睡觉 : 哈佛医学院高效睡眠指南 [英] 格雷格·D·贾克布（Gregg D.Jacobs） / 杨小虎、刘欢、朱宁 / 重庆大学出版社 / 2021-8-1 链接：pan.baidu.com/s/1T_IkBU0gZxtExFo6znZA7w?pwd=5mtr 提取码: 5mtr 本书首先回顾了安眠药的发展、疗效对比和副作用，以及有关睡眠方面的一些常见误区，让读者了解失眠的本质以及失眠患者许多得不偿失的做法。在此基础上，作者分享了自己在哈佛医学院的行为医学失眠治疗项目，用以指导大家循序渐进地克服失眠。该项目是美国非

饮食的迷思 : 关于营养、健康和遗传的科学真相 [英] 蒂姆·斯佩克特 / 李超群 / 广西师范大学出版社 / 2019-3 链接：pan.baidu.com/s/12FSV_Tcq8A4iGr7SW170Ng?pwd=rcu9 提取码: rcu9 当今都市流行各种所谓“健康”饮食法：生酮、轻断食、阿特金斯……各种营养成分也都受到过“健康”的追捧或“不健康”的指责：植物油的不饱和脂肪酸健康/植物油伤脑、动物脂肪不易高温变性/动物脂肪增加心血管疾病风险、糖分给大脑快速供能/糖分扰乱分泌、红肉提供丰富的维生素

临床医学的诞生 [法]米歇尔·福柯 / 刘北成 / 译林出版社 / 2022-2 链接：pan.baidu.com/s/1fYSANnX-7oHfrlhPl7o2EQ?pwd=efdc 提取码: efdc 【编辑推荐】 临床医学不是被发明出来的，而是有待于被发现；米歇尔•福柯颠覆性重构现代医学诞生历史 福柯的大多数研究致力于考察具体的历史，由此开掘出众多富有冲击力的思想主题，从而激烈地批判现代理性话语。在本书中，福柯以“空间、语言、死亡”为线索进行追溯，描绘了18、19世纪医学科学的一系列深刻变化。不同

人体简史 : 全彩插图版 [英] 比尔·布莱森 / 闾佳 / 浙江科学技术出版社 / 2024-4 链接：pan.baidu.com/s/1_bF2MM6QoBH3ngVZYDeOgg?pwd=h37e 提取码: h37e 从出生讲到死亡，人体远比宇宙更神奇！ 🧬编辑推荐🧬 ◆ 樊登、罗振宇等推荐！ ◆ 从出生讲到死亡，人体远比宇宙更神奇！ ◆ 全彩插图版！430张图片详解人体运行！ ◆ 世界长销书、第十六届文津图书奖作品! ◆ 世界销量千万册的科普巨著《万物简史》作者比尔·布莱森全新力作！ ◆ 雄霸《纽约时报》图书榜18周

上午代做那边把这批human tumor切片的原始扫描文件发过来了。 甩来一个网盘链接，看了一眼，快两百个G。 寻思着下到组里那台平时跑数据的台式机上看看全景图。结果文件刚解压完，双击打开看图软件，电脑风扇直接狂转，卡了五分钟直接蓝屏了。 去问了下师兄，他说这种全光谱扫描的十几标WSI图像，里面包着十几个通道的高清数据，普通的办公电脑根本带不动。 还好除了原始图像，那边还顺带发了一份跑完单细胞定位的Excel数据表和压缩好的合成

通过网盘分享的文件：QuPath 6.0 汉化补丁 链接: 网盘链接 提取码: mfhf 1、打开QuPath 2、将汉化补丁拖进窗口 3、Edit→Preferences→Language&region→Chinese 4、重启

上午老板又临时整幺蛾子，说上周五给的那个12标panel机制不够深，非要再塞两个巨噬细胞的指标进去看极化。要是以前自己手染，这时候我已经开始抓头发了。原本的显微镜通道早就排满了，硬塞两个新指标进去，波长肯定撞车。而且再去买两支新单抗，一来一回又得耗半个月，马内也是个无底洞。 不过现在心里一点波动都没有。我直接把老板的原话截图，转发给帮忙代做的那边评估。人家过了十来分钟就给出了新方案，顺手调换了下荧光素的先后

昨天刚拿外面做的那批高清数据在组会装了个大的，今天果不其然遭报应了。 老板看效果好，早上直接扔给我一盒新的human tumor切片。让我周末加个班，再搭个完全不同的12标panel出来，说趁热打铁把补充数据做了。 换作上个月我估计已经在工位上崩溃了。十几支抗体重新排通道，还要查文献配波长防串色，周末两天全搭进去都不一定搞得定。 不过现在熟练让人心疼。刚才直接把老板要看的十几个指标敲成个文档，准备顺手甩给之前代做的那边看一眼

除了单张切片的排雷，最容易出错的最多的就是TMA（组织芯片）。很多发高分文章的同行为了证明机制的普适性，往往会上一整张包含几十上百个human tumor点位的TMA来做染色验证。但TMA做TSA多重荧光放大的翻车率比普通切片高得多。今天挑几个核心痛点统一解答一下： 1. 微波洗脱时大面积掉点怎么办？ 这是TMA多标最惨烈的翻车现场。十几个通道意味着要反复进微波炉沸腾十几次。TMA本身附着力就差，极其容易脱片。实操中建议：必须使用最高级别的

随着空间生物学的普及，目前前沿的临床机制研究已经从单纯的单张切片展示，过渡到了几十甚至上百个大样本队列的多重免疫荧光验证。但为什么摸条件时单片染得好好的，一上大批量的tumor样本就大面积翻车？ 今天结合我们处理大队列的真实案例经验，实际解答几个大样本mIF最常见的实操痛点，帮大家少走弯路： 1. 边缘效应与修复液挥发 大批量切片一起进微波炉做TSA洗脱时，处于边缘的玻片受热往往不均，极易导致前一轮抗体洗脱不彻底。同时

在进行6-15标的human tumor切片多重免疫荧光（mIF）时，很多同行最头疼的就是“串色”问题。当你发现某种原本只在细胞核表达的蛋白，却在胞浆或胞膜上也出现了荧光信号，这就意味着实验出现了严重的假阳性。 结合日常交付中处理复杂微环境Panel的经验，今天和大家深度讨论一下mIF中串色的根本原因以及如何规避： 1. HRP（辣根过氧化物酶）灭活不彻底 这是多标实验最致命的痛点。TSA技术的底层逻辑是利用一抗和二抗上的HRP去催化荧光素沉积[10]。在

下午正在工位上摸鱼，上周寄出去代做的那边把初步的分析数据表发过来了。 点开那个几十兆的Excel看了一眼，人直接麻了。 里面密密麻麻好几万行，算法直接把那张切片上的细胞全圈出来了。每个细胞长在哪个坐标，谁挨着谁，相隔多少微米，全算得明明白白。 回想我上个月，对着自己染的那种背景巨脏的图，拿ImageJ里的计数器一个一个手动去点。点得眼睛都快瞎了，最后连哪边是间质哪边是核心区都分不清，纯纯的一个无情点击机器。 老板刚才

近年来，三级淋巴结构（TLS）在human tumor微环境（TME）研究中热度极高。很多发高分文献的课题组，都不再局限于单纯看单个免疫细胞浸润，而是利用mIF超多标技术，在原位精准识别TLS并证明其与预后的相关性。 今天结合近期几篇高分SCI，拆解一下如何在单张切片上染出标准的TLS，并实际解答几个大家平时实操容易卡壳的问题： 1. 为什么必须上mIF多标来鉴定TLS？ 普通单染或三色荧光很难证明一个完整的成熟TLS。因为标准的TLS需要同时具备B细胞区、T

很多同学费了九牛二虎之力，终于把human tumor切片的十几标mIF染出来了，但是面对几十个G的超清多光谱图像，除了截几张好看的图放在文章里，却不知道怎么提取更深层次的数据。 今天结合近期一篇IF20+的免疫微环境（TME）顶刊，来拆解一下大佬们是怎么把荧光超多标的空间价值榨干的。这篇文章没有停留在“图片展示”层面，而是做了深度的空间定量分析，实际解答了大家“拿了高清图怎么编故事”的痛点： 1. 从“单阳性计数”到“多重表型定义

近期我们在拆解TME（微环境）相关的顶刊文献时发现，通过mIF技术实现单张human切片上的超多标染色，已经成为打动审稿人的核心手段。很多同行在设计复杂Panel时，往往只关注抗体种属，却忽略了荧光素与靶标蛋白的匹配逻辑，导致最后染出来的图信号微弱或全屏串色。 结合我们平时处理复杂human样本的经验，分享几个在Panel设计时非常实用的干货原则，帮大家少走弯路： 1. 强弱搭配原则 这是多标荧光最基础也最容易踩坑的原则。简单来说，表达丰

上周看了外面做的15标结果确实馋人，老板这周就让我自己也搭一套human tumor微环境的panel，我请问呢？ 对着文献扒了好几天把十几个指标定好了。结果卡在买抗体这一步。国内问了七八家，有两三个冷门指标根本没现货。有一家说有，要等八周从国外调过来？进口也买过，师兄说拆开一看克隆号不对的时候两眼一黑了都，退货扯皮又耗了两周，到现在还没凑齐。 师兄说别死磕了，这种十几标的实验自己从头摸条件太亏。抗体买错一两支马内就打了水

做human临床样本的多重免疫荧光，很多同行一上来就关注抗体怎么选、通道怎么排，但往往忽略了一个更前置的问题：组织固定和抗原修复。这两个环节一旦出问题，后面染得再好也白搭。今天就着平时实验里踩过的坑，把几个关键点整理出来。 1. 固定液的选择与固定时间 Human tumor组织离体后，固定速度直接影响后续抗原的保存质量。常规选择是10%中性福尔马林，但固定时间必须严格控制。固定不足（小于6小时）会导致组织中心区域抗原流失，染色

这周后台收到不少关于human样本多重免疫荧光（mIF）的私信。很多同行动手做tumor微环境的多标时，经常在一些细节上翻车。今天索性把大家最常问的几个痛点总结一下，都是实验室平时拿切片喂出来的经验： 1. 为什么我的切片微波一洗脱就掉？ Human样本尤其是带有坏死区域的tumor组织极易掉片。做TSA多标要反复微波洗脱，掉片是重灾区。建议务必使用防脱载玻片，且烤片时间要足（60℃建议过夜）。微波加热时切忌让缓冲液剧烈沸腾，保持中低火力微

近年来随着空间生物学的发展，针对human tumor微环境（TME）的病理染色技术经历了显著的迭代。传统的3色或4色免疫荧光受限于显微镜通道和抗体种属冲突，难以全景式解析复杂的免疫浸润网络。 为了在单张切片上实现更高维度的原位数据获取，目前行业内正逐步向6-15标的高通量多重免疫荧光（mIF）技术过渡。实现这一跨越的核心技术壁垒主要在于两个方面： 1.信号的级联放大与抗体洗脱。利用TSA技术共价结合的原理，可以在保证荧光信号不淬灭的前

今天老板开恩，说为了让机制做深一点，让我去买个荧光多标的试剂盒，把human微环境里的十几个指标染出来。 去问了下价格，看完报价单直接沉默了。一套多色试剂盒大几万马内就不说了，关键是里面自带的抗体很多都不符合我的实验要求。 这意味着还得另外掏马内去买各种单抗来做预实验。按我平时做实验的手气，光是摸索微波洗脱的时间和试错抗体的浓度，估计就能耗掉小半年，连带着还要搭进去一堆切片。最无语的是，组里的显微镜根本扫

炎症模型肝组织免疫荧光这种正常吗，前三是空白，后三是模型，多聚甲醛固定石蜡切片，目前感觉非特异荧光特别多，网上很少有做肝免疫荧光的，不确定这些强的荧光是否为肝组织自身散发荧光，求各位大佬帮忙看看（曝光强度基本一致）

近期阅读了多篇IF值10+以上的免疫相关顶刊，发现如今针对human样本的TME（微环境）研究，传统的单染或三色荧光已经很难满足审稿人对机制深度的要求。今天和大家拆解一下空间生物学中的mIF多标实验设计逻辑。 核心亮点在于没有使用大量连续切片，而是在同一张human组织切片上，利用mIF技术完成了12个Marker的同屏共定位。1. Panel设计的层次感：作者将标志物分为了三个维度。第一层是结构与分型（如Pan-CK定位上皮/实性区域）；第二层是免疫浸润底色

最近接了好几个临床送来的human源tumor石蜡切片，说实话，做免疫荧光真的很容易让人头秃。 显微镜满打满算就四个通道，除掉DAPI，一次只能看三个指标。客户想看T细胞亚群再加两个标志物，根本排不开。而且组织的背景太脏了，自发荧光经常跟非特异性杂音混在一起，为了摸索修复液和抗体浓度，头发掉了一大把，试剂盒的钱也没少花。 其实这种复杂的课题，硬扛并不是最好的选择。多重免疫荧光技术已经成熟，我们优化了一套全光谱扫描和TSA信